問：原代細胞和細胞系有什么區(qū)別？

答：原代細胞直接源自組織，一旦培養(yǎng)，原代細胞的壽命是有限的。原代細胞是理想的，因為它們保留了體內(nèi)觀察到的許多標記。細胞系是不斷生長和復(fù)制并經(jīng)歷遺傳轉(zhuǎn)化的細胞群，具有無限的生長潛力。出于醫(yī)學(xué)和/或研究目的，細胞系已在體外維持。細胞系可以通過非常大量的傳代培養(yǎng)進行培養(yǎng)，并且在非常高的傳代次數(shù)下可能會發(fā)生進一步的基因型/表型變化。一般來說，細胞系缺乏體內(nèi)觀察到的許多標記，并且也顯示出與原代細胞非常不同的標記譜。

問：ScienCell 如何確認細胞類型？

A. 細胞類型可以通過多種方式確認。細胞形態(tài)學(xué)非常重要，可以幫助我們識別正確的細胞。此外，我們的質(zhì)量控制部門使用免疫熒光來確認特定細胞類型的識別標記的存在。免疫熒光也可用于識別污染細胞。

問：我可以獲得有關(guān)我的批次細胞的哪些捐贈者信息？

答：我們保存所有人類和動物原代細胞的記錄。如果您有特定要求（年齡和/或性別），請在訂購前聯(lián)系我們的客戶服務(wù)部門。

問：我們是否對我們的細胞進行人類白細胞抗原分型？

答：人類白細胞抗原 (HLA) 分型是一種確定一個人的組織與另一個人的組織匹配程度的方法。我們目前不在 ScienCell 研究實驗室對此進行測試。

問：我的原代細胞瓶是否 100% 純？

答：原代細胞永遠不會是 100% 純的，但是，我們會盡力獲得盡可能純的細胞。總是存在污染細胞。

問：我需要多少經(jīng)驗才能開始使用正常原代細胞？

答：強烈推薦具有在無菌條件下使用層流罩工作的經(jīng)驗，并且具有使用其他細胞類型的經(jīng)驗是有利的。如果您是細胞培養(yǎng)的初學(xué)者或想建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們可以為您提供幫助。請聯(lián)系我們的細胞培養(yǎng)專家。

問：收到后我應(yīng)該如何處理冷凍保存的細胞？

A. 收到包裹后，立即將冷凍保存的細胞從干冰運輸容器轉(zhuǎn)移至液氮中。快速從運輸容器轉(zhuǎn)移到液氮中，以防止細胞解凍。請勿將細胞儲存在 -20°C 或 -80°C 下，因為這會對細胞造成不可逆轉(zhuǎn)的損壞。

問：當(dāng)我第一次對凍存細胞進行平板培養(yǎng)時，是否需要離心細胞以去除 DMSO？

答：我們不建議通過離心細胞來去除 DMSO 殘留物。離心過程對細胞的危害可能比 DMSO 殘留物更大，特別是如果使用不適當(dāng)?shù)母咚佟．?dāng)您鋪板細胞時，DMSO 將在培養(yǎng)基中充分稀釋。例如，如果將整個冷凍管（1 毫升）細胞放入裝有 15 毫升培養(yǎng)基的 T-75 燒瓶中，則 DMSO 濃度將低于 0.67% (v/v)。如果以 5000 - 10,000 個細胞/cm2 鋪板細胞，DMSO 的濃度會更低。

問：我應(yīng)該使用什么類型的培養(yǎng)箱來培養(yǎng) ScienCell 原代細胞？

我們建議使用 37°C、5% CO ₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)來自 ScienCell 的所有原代細胞。所有 ScienCell 培養(yǎng)基都需要 5% CO ₂來維持細胞的最佳 pH 值。

問：如何用冷凍保存的細胞建立培養(yǎng)物？

A. 注意：詳細說明請參閱電池產(chǎn)品表。

1. 從液氮中取出一小瓶細胞，注意保護手和眼睛。

2. 將小瓶上的蓋子擰松 1/4 圈 10 秒，以釋放可能滯留在螺紋中的液氮，然后重新擰緊蓋子。

3. 將冷凍小瓶放入 37°C 水浴中。握住并輕輕旋轉(zhuǎn)小瓶，直至內(nèi)容物全部解凍。迅速從水浴中取出小瓶，用 70% 乙醇擦拭，然后轉(zhuǎn)移至無菌區(qū)。

4. 小心地取下蓋子，不要接觸內(nèi)螺紋。輕輕地將小瓶中的內(nèi)容物重新懸浮并分配到含有培養(yǎng)基的平衡的聚-L-賴氨酸或纖連蛋白包被的培養(yǎng)容器中（請參閱產(chǎn)品表上列出的具體說明）。

5. 蓋上培養(yǎng)容器的蓋子或蓋子，輕輕搖動容器以使細胞均勻分布。如有必要，松開蓋子以進行氣體交換。

6. 將培養(yǎng)容器放回培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2/95% 空氣）。

7. 為了獲得最佳結(jié)果，培養(yǎng)開始后至少 16 小時內(nèi)不要擾動培養(yǎng)。第二天刷新培養(yǎng)基以去除殘留的 DMSO 和未貼壁的細胞（除非產(chǎn)品表上另有說明）。

問：我應(yīng)該向細胞培養(yǎng)瓶中添加多少體積的培養(yǎng)基？

A. 建議在 T-25 燒瓶中添加 5 ml 培養(yǎng)基，在 T-75 燒瓶中添加 15 ml 培養(yǎng)基，在 T-150 燒瓶中添加 30 ml 培養(yǎng)基。

問：我應(yīng)該多久更換一次原代細胞的細胞培養(yǎng)基？

答：請參閱您正在使用的細胞類型的產(chǎn)品表以獲取具體說明。一般來說，根據(jù)細胞的融合情況，每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。注意：冷凍保存的細胞解凍并鋪板后，應(yīng)在約 16 小時后進行第一次培養(yǎng)基更換，以去除 DMSO 殘留和死細胞。

問：我應(yīng)該在什么匯合處傳代細胞？

答：這取決于細胞類型。例如，內(nèi)皮細胞永遠不應(yīng)該變得太匯合（90%-100%），因為這會促進污染細胞的生長并導(dǎo)致內(nèi)皮細胞衰老。另一方面，成纖維細胞可以在較高的匯合度（90%-98%）下進行傳代培養(yǎng)，并且不會受到較高匯合度的不利影響。一般來說，原代細胞不應(yīng)該變得太匯合，因為這會導(dǎo)致細胞衰老并促進污染細胞的生長。

問：正常原代細胞的推薦分流比是多少？

答：ScienCell 研究實驗室不推薦正常細胞的分流比，因為胰蛋白酶消化后的細胞數(shù)量各不相同。我們建議在胰蛋白酶消化后對細胞進行計數(shù)，并按照產(chǎn)品表上針對特定細胞類型推薦的接種密度接種細胞。

問：群體倍增和傳代次數(shù)有什么區(qū)別？

答：群體倍增是指培養(yǎng)物中細胞總數(shù)增加兩倍，最常在指數(shù)或“對數(shù)"生長階段提及。術(shù)語傳代次數(shù)是指將細胞群從培養(yǎng)容器中取出并進行傳代培養(yǎng)（傳代）過程的次數(shù)，以保持細胞處于足夠低的密度以刺激進一步生長。

問：我可以使用正常原代細胞進行多少次傳代？

答：ScienCell 不使用術(shù)語“傳代"來描述增長潛力，因為每個客戶使用不同的分流比。ScienCell 研究實驗室在細胞產(chǎn)品表上標出了預(yù)期的群體倍增次數(shù)。

問：非增殖細胞可以傳代培養(yǎng)嗎？

A. 非增殖細胞不能進行傳代培養(yǎng)，因為它們不增殖。這包括以下細胞類型：神經(jīng)元、小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞和其他一些細胞類型。產(chǎn)品表將表明細胞是否不增殖。

問：我可以重新冷凍 ScienCell 的正常原代細胞嗎？

答：我們不建議客戶重新冷凍 ScienCell 的人類和動物原代細胞。

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